外泌體差速超速離心提純方法:
DUC 是最早和最常報道的外泌體分離策略。操作步驟如下。該方法過程簡單,不引入其他標記,適用于大劑量樣品分析。然而,鑒于細胞外液具有高度異質性,DUC 可導致非理想的外泌體聚集; 因此,它可能不是一種合適的外泌體純化方法,因為大小相似的不同囊泡和蛋白質聚集體可以在 100,000 × g 下共同形成。因此,應進一步純化使用該方法制備的外泌體。此外,離心力會導致外泌體結構的破壞,進而影響下游實驗,特別是外泌體的功能分析。
外泌體凍干工藝開發與處方設計:
1. 核心目標: 保持外泌體完整性(膜結構、RNA/蛋白質活性);提高凍干后復溶性及長期穩定性。
2. 關鍵步驟與實驗設計保護劑篩選:常用海藻糖、蔗糖、甘露醇等非還原性糖類,通過氫鍵穩定脂質雙層結構,減少冰晶損傷。 實驗方案:對比不同保護劑(如海藻糖濃度梯度)對外泌體粒徑、Zeta電位、蛋白質含量的影響。
凍干曲線優化: 分析指標:水分殘留量(<3%)、復溶時間(<1分鐘)、形態(納米流式檢測,需要由用戶完成)。
外泌體凍干可提供如下服務:
1. 提供外泌體凍干配方開發。
2. 提供外泌體凍干工藝曲線開發。
3. 提供外泌體凍干生產放大工藝開發。
4. 提供外泌體上下游凍干設備開發。